文章中使用的單細胞建庫平臺為墨卓生物的MobiNova?-100，分析軟件為MobiVision?，利用該平臺開展的單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術，揭示了BHD可能通過Cav1調(diào)控外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸來促進腦缺血后的血管生成和神經(jīng)功能恢復。

BHD對腦缺血后神經(jīng)行為評分和病理損傷的改善

實驗采用了中腦動脈閉塞（MCAO）技術來建立小鼠的腦缺血模型，以此來模擬人類腦卒中的病理狀態(tài)。小鼠被隨機分配到不同的實驗組以接受不同劑量BHD治療，治療開始于手術后6小時，持續(xù)7天。通過神經(jīng)行為評分和組織病理學評估，包括HE染色和Nissl染色，BHD顯示出對腦缺血后小鼠神經(jīng)功能恢復的促進作用。這些結果表明BHD能夠減輕腦缺血引起的神經(jīng)功能缺損和腦組織損傷。

BHD促進腦缺血后小鼠的血管生成

研究人員用免疫熒光染色技術檢測了小鼠腦缺血側皮層的微血管密度（MVD），進而用以衡量血管生成。實驗結果顯示，與模型組（未經(jīng)BHD治療的腦缺血小鼠）相比，BHD治療組的小鼠在缺血側皮層區(qū)域的MVD有顯著增加。研究者還使用了CD31/Ki67免疫熒光雙染技術來評估血管內(nèi)皮細胞的增殖情況。雙標陽性細胞的數(shù)量增加表明BHD不僅促進了新血管的形成，還增加了血管內(nèi)皮細胞的增殖活性。這些證據(jù)表明BHD能夠促進新血管的形成，從而改善腦缺血區(qū)域的血液供應。

單細胞測序分析BHD對MCAO小鼠腦組織細胞組成的影響

MCAO模型小鼠進行了BHD治療后，收集其缺血側皮層區(qū)域的腦組織樣本進行單細胞測序分析。與對照組相比，BHD治療顯著改變了缺血側皮層區(qū)域的細胞組成，某些細胞類型的豐度發(fā)生了變化，例如缺血區(qū)域的血管內(nèi)皮細胞數(shù)量在BHD的作用下有所增加，這與BHD促進血管生成的觀察結果一致。表明BHD可能通過調(diào)節(jié)特定細胞類型的基因表達來發(fā)揮作用。

單細胞測序數(shù)據(jù)還揭示了BHD對特定細胞類型中差異表達基因（DEGs）的影響。通過比較MCAO模型組與BHD治療組之間的基因表達差異，研究人員識別了與血管生成、細胞增殖、遷移和神經(jīng)保護等相關的基因。

富集分析探討了BHD影響的生物學途徑和功能。KEGG通路分析揭示了BHD影響的特定信號通路，GO富集分析揭示了BHD調(diào)節(jié)的細胞過程和分子功能。這些分析結果有助于理解BHD如何在分子層面上促進腦缺血后的恢復。

BHD通過Cav1調(diào)節(jié)外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸影響血管生成

之前有研究表明，caveolin-1（Cav1）細胞間信號傳遞中起重要作用，所以本研究特意觀察了該基因在不同細胞類群之間的表達水平。結果發(fā)現(xiàn)Cav1明顯集中表達在血管內(nèi)皮細胞。

本研究借助單細胞測序技術進行了BHD在腦缺血后促進血管生成和神經(jīng)功能恢復作用的全面理解，揭示了BHD通過Cav1調(diào)節(jié)外泌體MALAT1/YAP1/HIF-1α軸的潛在分子機制。這一機制可能為腦缺血后血管生成和神經(jīng)功能恢復提供了新的治療策略。這些發(fā)現(xiàn)不僅增進了我們對BHD作用方式的理解，也為未來的藥物開發(fā)和臨床治療提供了重要的分子靶點。